| |
重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發(fā)酵與純化工藝 |
|
|
 |
|
|
| 一種重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發(fā)酵與純化工藝，所述的構(gòu)建方法包括：以嗜熱菌中編碼ＳＯＤ的基因?yàn)槟０澹O(shè)計(jì)帶有限制性酶切位點(diǎn)的特異引物擴(kuò)增目的基因，經(jīng)雙酶切后連接于經(jīng)相同酶切處理后的質(zhì)粒載體ｐＥＴ２８ａ中，構(gòu)建重組質(zhì)粒，命名為ｐＳＯＤ，然后經(jīng)化學(xué)轉(zhuǎn)化法將質(zhì)粒ｐＳＯＤ轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸桿菌ＢＬ２１（ＤＥ３），經(jīng)篩選，獲得高產(chǎn)ＳＯＤ的菌株，完成ＳＯＤ工程菌的構(gòu)建；所述的發(fā)酵工藝：發(fā)酵過程經(jīng)過一級(jí)種子培養(yǎng)、二級(jí)種子培養(yǎng)、上罐發(fā)酵、誘導(dǎo)表達(dá)四個(gè)步驟，最終獲得發(fā)酵產(chǎn)物－ＳＯＤ；本發(fā)酵方法可以實(shí)現(xiàn)ＳＯＤ的高效表達(dá)，目的蛋白的表達(dá)量占菌體蛋白總量的６０％以上；它具有ＳＯＤ有良好熱穩(wěn)定性與耐熱性，表達(dá)產(chǎn)物占全菌蛋白的６０％以上，且全部為可溶性蛋白，避免了包含體復(fù)性過程的種種麻煩；純化工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)率高，成本低廉，終產(chǎn)物ＳＯＤ的純度高、活力高、穩(wěn)定性強(qiáng)等特點(diǎn)。 |
|
|
|
|
|
|
|
|
重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發(fā)酵與純化工藝
一種重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發(fā)酵與純化工藝，它包括：以嗜熱菌中編碼ＳＯＤ的基因?yàn)槟０澹O(shè)計(jì)帶有限制性酶切位點(diǎn)的特異引物擴(kuò)增目的基因，經(jīng)雙酶切后連接于經(jīng)相同酶切處理后的質(zhì)粒載體ｐＥＴ２８ａ中，構(gòu)建重組質(zhì)粒，命名為ｐＳＯＤ，然后經(jīng)化學(xué)轉(zhuǎn)化法將質(zhì)粒ｐＳＯＤ轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸桿菌ＢＬ２１（ＤＥ３），經(jīng)篩選，獲得高產(chǎn)ＳＯＤ的菌株，完成ＳＯＤ工程菌的構(gòu)建。
|
|
|
|
|
|
|
| 專利號(hào): |
200810061168 |
| 申請(qǐng)日: |
2008年3月13日 |
| 公開/公告日: |
2008年10月1日 |
| 授權(quán)公告日: |
|
| 申請(qǐng)人/專利權(quán)人: |
浙江清華長(zhǎng)三角研究院、嘉興博泰生物科技發(fā)展有限公司 |
| 國家/省市: |
浙江(33) |
| 郵編: |
314050 |
| 發(fā)明/設(shè)計(jì)人: |
孟凡國、夏勇、王天文、胡衛(wèi)江、周海夢(mèng) |
| 代理人: |
翁霽明 |
| 專利代理機(jī)構(gòu): |
杭州市專利事務(wù)所(33101) |
| 專利代理機(jī)構(gòu)地址: |
浙江省杭州市解放路138號(hào)(310001) |
| 專利類型: |
發(fā)明 |
| 公開號(hào): |
101275144 |
| 公告日: |
|
| 授權(quán)日: |
|
| 公告號(hào): |
000000000 |
| 優(yōu)先權(quán): |
|
| 審批歷史: |
|
| 附圖數(shù): |
2 |
| 頁數(shù): |
7 |
| 權(quán)利要求項(xiàng)數(shù): |
2 |
| |
| |
|
